液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。
液相色谱仪的用途:
1、在聚合物的分析中,吸附色谱一般用来分离添加剂,如偶氮染料、抗氧化剂、表面活性剂等,也可用于石油烃类的组成分析。
2、用于氨基酸、蛋白质的分析,也适合于某些无机离子(NO3-、SO42-、Cl-等无机阴离子和Na+、Ca2+、Mg2+、K+等无机阳离子)的分离和分析,具有十分重要的作用。
3、适用于水溶液的体系,又适用于有机溶剂的体系。当所用的洗脱剂为水溶液时,称为凝胶过滤色谱,其在生物界的应用比较多。
液相色谱仪的操作步骤:
1、准备:
①准备所需流动相,用合适的0.45滤膜过滤,超声脱气20min;
②根据待测样品的需要更换合适的色谱柱(注意方向)和定量环;
③配制样品的标准溶液,用合适的0.45um滤膜过滤;
④检查仪器各部件是否连接正常,其中包括电源线、数据线、地线以及输液管道。
2、开机:
①接通电源,一次打开检测器、输液泵,待检测器自检结束,显示测量状态时再打开电脑、打印机及电脑显示器等;
②更换流动相并排气泡;
③将管路的不锈钢过滤头放入装有准备好的流动相储液瓶中;
④逆时针转动泵的排空阀,约半圈,之后拧松排空阀;
⑤按输送泵(purge)键,绿灯亮时开始以5.0ml/min流速冲洗约2分钟,管路无气泡时按下(stop)键,重新设定流速值。
3、设计参数:
①流速设定
②波长设定
③设定完成按运行(run)按键
④色谱工作站操作:依次执行→打开“在线工作站”→“通道1”→“OK”→“数据采集”后进行零点校正、查看基线,确定基线稳定后关闭查看基线可以进样。
进样后进行采集、预览、查看结果、打印
4、进样:
①进样前将(A/Z)检测器按键调零查看基数是否在0mv,有偏差则(零点校正)按键进行调试
②用样品清洗注射器、排除气泡、抽取适量后将手动进样阀杆调到位置,样品注入进样阀后调到(Inject)位置,以此进样操作步骤完成,进入在线工作站自动采集数据流程。
5、系统清洗:
由于分析样品时流动相系统中含有缓冲盐类物质,需使用10%甲醇水溶液,以1.0ml/min冲洗40分钟后更换甲醇试剂,以同样1.0ml/min冲洗40分钟,停泵,关机。