高效液相色谱实现对试样的分析的同时也要注意维护

高效液相色谱（HPLC）是色谱法的一种，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。高效液相色谱的维护建议考虑以下方面：

一、流动相及样品的制备要求

1.高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤，且流动相需要定期更换。

2. 流动相脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法）；

3. 样品溶解后，用0.22微米的有机系膜或者水系膜过滤。

二、高压恒流泵的维护和保养

1. 高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度升高，建议每次升高0.2mL/min，当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。

2. 特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇或甲醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换。

3．在仪器使用完了以后，要及时清洗管路并冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。

三、色谱柱的维护和保养

1．所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.22um薄膜过滤，而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。

2．所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.22um水膜过滤后使用，所有试液均现用现配。并且在进样的样品都必须经过0.22um薄膜针筒过滤后进样。

3．所使用到的大流速为1.0mL/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。

4．仪器检测完，需要用流动相梯度洗脱色谱柱1小时以上。

四、工作站的维护

出现死机可重启计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。