高效液相色谱分析柱的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
柱结构:
一般色谱柱是由色谱柱管、末端接头、卡套(又称密封环)和过滤筛板等组成。
柱连接方式:
高效液相色谱分析柱柱接头通过过滤片与色谱柱管连接,在色谱分析柱管的上下两端安装过滤片。过滤片一般用多孔不锈钢烧结材料制成,过滤片上的孔径小于填料颗粒直径,可阻挡流动相中极小的机械杂质以保护色谱柱,但流动相可顺利通过。柱入口和柱出口的连接管的死体积越小越好,一般常用窄孔(内径0.13mm)厚壁(1.5~2mm)不锈钢管,以减少柱外死体积。
柱规格:
—般采用直形柱管,标准填充柱柱管内径为4.6mm或3.9mm,长10~50cm,填料粒度5~10um,柱效达5000~10000块理论塔板/m。使用3~5um填料,柱长可减至5~10cm。当使用内径为0.5~1mm的微孔填充柱或内径为30~50um的毛细管柱时,柱长为15~50cm。
当使用粗内径短柱或细内径长柱时,应注意柱内体积减小,由柱外效应引起的色谱峰形展宽。柱外效应是指色谱柱之外的造成色谱峰展宽的因素,主要由进样器、检测器及它们与柱之间的连接管路所产生。此时应对进样器、检测器和连接接头作特殊设计,以减少柱外死体积。